Руководство по выбору счетчика клеток: 4 критических критерия, которые должна проверить каждая лаборатория
June 16, 2025
Использование счетчика клеток может значительно повысить эффективность экспериментов по подсчету клеток. Однако при работе со сложными образцами могут возникнуть определенные трудности:
-Риск смещения выборки: Однопольныеподсчеты подвержены смещению распределения клеток. Смягчить это можно путем смешивания образцов и усреднения триплетных подсчетов.
-Ограничения автофокусировки:Производительность падает в образцах с низкой концентрацией/гетерогенных образцах, но стабильна при умеренной плотности и однородной морфологии.
-Пробелы в обнаружении флуоресценции: Одноканальные системы возбуждениянедооценивают двойные флуоресцентные маркеры, ограничивая многопараметрический анализ, несмотря на экономию средств.
Для исследователей точность счетчика клеток обычно оценивается по следующим трем критериям:
-Дважды проверьте идентификацию устройств, сравнив исходное изображение клеток с наложением обнаружения прибора: Оцените точность распознавания клеток, проверив, насколько точно устройство обрисовывает клетки на захваченном изображении.
-Проведите повторные эксперименты по подсчету для оценки межгруппового CV (коэффициента вариации): Выполните несколько повторных измерений, чтобы определить согласованность и воспроизводимость подсчетов.
-Сравните результаты сПроточной цитометриейили ручным подсчетом: Проверьте производительность прибора, сравнив его результаты с результатами, полученными с помощью проточной цитометрии или традиционных методов ручного подсчета.
Полевая визуализация для минимизации систематической ошибки
Чтобы устранить ограничения однопольной визуализации и уменьшить систематическую ошибку, счетчик клеток C200FL оснащен режимом подсчета в 3 полях. Эта конструкция значительно расширяет область подсчета, достигая в общей сложности 7,6 мм². Распределяя поля по разным областям образца, этот подход минимизирует смещение выборки и обеспечивает более точное представление закономерностей распределения клеток.
Линейность подсчета клеток CHO (R²＞0,999)
Высокая повторяемость при многократном подсчете клеток 293 (CV＜5%)
Фиксированная конструкция фокуса повышает стабильность изображения
В C200FL используется система визуализации с фиксированным фокусным расстоянием, которая минимизирует колебания, вызванные алгоритмами автофокусировки, и значительно сокращает время подсчета. Эта конструкция обеспечивает стабильное качество изображения при многократном захвате, тем самым снижая коэффициент вариации (CV) при повторных измерениях. Четкое и стабильное изображение обеспечивает надежную основу для точного распознавания клеток алгоритмом анализа.
Интеллектуальный алгоритм повышает точность распознавания клеток
В дополнение к обычным параметрам, таким как диаметр, округлость и пороги флуоресценции, мы внедрили расширенные параметры интерпретации границ клеток. Это позволяет точно идентифицировать края клеток, повышая точность обнаружения сгруппированных клеток и улучшая общую производительность распознавания клеток.
Примечание: Желтый кружок указывает на скопления клеток.
Высокочувствительная система обнаружения флуоресценции для более широкого применения
Серия счетчиков клеток RWD оснащена независимой оптической конструкцией с двумя флуоресцентными каналами. Модель C200FL оснащена высокопроизводительными оптическими компонентами и алгоритмами очистки фона, что позволяет эффективно захватывать слабые сигналы флуоресценции, сводя к минимуму фоновый шум. Это приводит к получению четких, свободных от шума флуоресцентных изображений. В сравнительных испытаниях с проточной цитометрией скорость трансфекции, обнаруженная обеими системами, различалась не более чем на 10%.
Подсчет флуоресценции клеток периферической крови PBMC AOPI
(Зеленый цвет представляет живые клетки, окрашенные флуоресценцией AO, а красный — мертвые клетки, окрашенные флуоресценцией PI.)RWD C200FL
